第3 0 卷第3 期20 0 9 年9 月内蒙古农业大学学报Jo u rn a lo f In n e rM o n g o liaA g r ic u ltu r a lU n iv e r sityV 0 1. 30N o . 3S e p . 2 0 0 9鲫鱼尾鳍细胞培育及冻存与复苏的开始研讨’孟凡华1, 狄栋栋1, 黄凯2( 1.内蒙古农业大学生物工程学院, 呼和浩特010018; 2.内蒙古必威安泰生物科技有限公司, 北京10 260 0 )摘要:本文主要从鱼类种质资源保存的意图动身, 一方面以鲫鱼尾鳍安排为资料, 进行细胞培育, 并对所取得的原代和传代细胞进行形态学调查; 另一方面以传代细胞为资料, 选用逐渐降温法和悬于液氮罐口两种办法冻存细胞,每种办法均以甘油和D M S O 为冻存剂, 经过核算复苏率, 找到最适合的冻存办法与冻存剂。 试验成果: 成功培育了鲫鱼尾鳍细胞, ...
第3 0 卷第3 期20 0 9 年9 月内蒙古农业大学学报Jo u rn a lo f In n e rM o n g o liaA g r ic u ltu r a lU n iv e r sityV 0 1. 30N o . 3S e p . 2 0 0 9鲫鱼尾鳍细胞培育及冻存与复苏的开始研讨孟凡华1, 狄栋栋1, 黄凯2( 1.内蒙古农业大学生物工程学院, 呼和浩特010018; 2.内蒙古必威安泰生物科技有限公司, 北京10 260 0 )摘要:本文主要从鱼类种质资源保存的意图动身, 一方面以鲫鱼尾鳍安排为资料, 进行细胞培育, 并对所取得的原代和传代细胞进行形态学调查; 另一方面以传代细胞为资料, 选用逐渐降温法和悬于液氮罐口两种办法冻存细胞,每种办法均以甘油和D M S O 为冻存剂, 经过核算复苏率, 找到最适合的冻存办法与冻存剂。 试验成果: 成功培育了鲫鱼尾鳍细胞, 现已传至第7 代; 细胞在传代过程中呈成纤维细胞增多的趋势; 选用逐渐降温法和运用D M S O 为冻存剂细胞复苏率较高。关键词:鲫鱼; 尾鳍;细胞培育; 冻存文献标识码: A中图分类号: ¥ 9 65. 117文章编号: 10 0 9 357 5( 20 0 9 )0 30 238 0 3C A R PT A L L F INT IS S U EC U L T U R EA N DT H EP R E L L M I N A R YS T U E Y0 FC R Y O P R E S E R V A T lO NA N DR E C O V E R YM E N GF a n h u a l, D ID o n g d o n 9 1, H U A N GK a i2( 1. C o lleg e矿B io lo g y E n g in e e r in g , In n e rM o n g o liaA g ricu ltu ra l晚池瑙缈, H u h h o t2 . In n e rM o n g o lia b ig o nb io te c hC O . , L T D , & { |: jf, lg0 10 0 18 , C h in a ;10 260 0 ; C h in a )A b st r a c t : T h isresea rch a im s a t f ishg e r mp la sm p reserv a tio n . F irstly , b y o b serv in gth e resu lt f r o m th ee x p e r im e n to fcu ltu rin gth ecells o f e r u c isnc a r pf intissu e , m o r p h o lo g ic a lf e a tu r e s o fp r im a r yc u ltu r e d a n dsu b c u ltu r e dc e llsw e r ee x a m in e d . S e co n d ly , b yca lcu la tio n a n da sse ssin gth e cell r e c o v e r yr esu lts o fsto r in gsu b c u ltu r e dc e llsbyeith erg r a d u a llyc o o in gd o w n o rh a n g in gin th eU qI】 idn itro -g e nta n k , th eb etterc r y o p r e se r v a tio nm e th o d a n dsu ita b le a n tif r e e z e w e r e d eterm in ed . Inth etest, g ly cerina n d D M S Ow e r e u sed 8 8 a n tif reeze. T h e r esu lt sh o w s th a t th e c r u c ia nc a r pf in tissu e cells w e r esu c c e ssf u llycu ltu red in to th e 7 thg e n e r a tio n a n d th a t th e r e is ag r o w in g te n d e n c yo fin c r e a sin gf ib r o b la st w h e ntr a n sf e r r in gcells. H ig h err e c o v e r yr a te w e r e a lsoh a p p e n e dw h e ng ra d u a l co o lin gd o w na n d D M S Ow e r eem p lo y ed . T h eresu lt sh o w s th a t th ee m c ia nca r pf in tissu e cells w e r esu c c e ssf u llycu ltu red in to th e7 thg e n e r a tio na n dth a t th e r e is ag ro w in gte n d e n c yo fin c r e a sin gf ib r o b la st w h e ntra n sf errin g cells. H ig h err e c o v e r yr a te w e r e a lsoh a p p en edw h e ng r a d u a lc o o lin gd o w na n dD M S Ow e r eem p lo y ed .K e yw o r d s:C r u sia nca rp ;F intissu e;C u ltu r in gth ecells; C r y o p r eser v a tio n鱼类细胞冻存研讨, 对种质保存, 品种改良有重要意义。 跟着人口的一向增加, 人类对自然资源的开发强度渐渐的变大, 导致了国际许多珍稀鱼类濒临灭绝, 这一严重情况引起了全国际的重视。 培育的传代细胞使用超低温冻存技能能无限的保存下去, 这样, 假如现在把濒危鱼类的细胞选用细胞冻存技能保存起来, 使用动物克隆技能就可以轻松又有用的康复和扩展濒危物种的种群数量, 乃至将来可以使濒临灭绝或现已灭绝的物种再现于世。 本文主要从鱼类种质资源保存的意图动身, 对冻存的传代细胞核算复苏率, 找到最适合的冻存办法与冻存剂。'收稿日期: 20 0 9 0 8 0 3作者简介: 孟凡华( 19 7 8一), 硕士, 讲师, 主要是做水产生物学研讨.1资料与办法1. 1试验资料幼龄鲫鱼, 来自呼和浩特市东瓦窑菜市场。1. 2选材把鱼放在超净工作台内, 铺上无菌纱布, 用酒精棉球消毒鱼体, 取尾鳍安排先用H a n k s溶液( 不含胎牛血清)充沛浸洗3次, 以除掉脂肪、 血细胞等; 再用M 19 9 培育基( 含20 %胎牛血清lO O IU /m l双抗)洗刷1次, 弃去洗刷液。万方数据
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